圖1 實(shí)驗(yàn)流程圖

①通過(guò)UPLC-MS/MS獲得靈芝孢子粉的化學(xué)信息，并用質(zhì)譜分子網(wǎng)絡(luò)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行快速解析；

②通過(guò)中性粒細(xì)胞或巨噬細(xì)胞缺陷斑馬魚(yú)模型，以中性粒細(xì)胞數(shù)量、巨噬細(xì)胞數(shù)量及巨噬細(xì)胞吞噬活性三個(gè)方面來(lái)評(píng)價(jià)其免疫調(diào)節(jié)活性；

③根據(jù)靈芝孢子粉樣品中各成分的峰面積及相應(yīng)的藥效，通過(guò)偏最小二乘回歸（PLSR）算法計(jì)算各成分的免疫活性并排序，篩選出潛在的免疫活性成分。

? 靈芝孢子粉（GLS）

? 破壁靈芝孢子粉（BGLS）

? 去壁靈芝孢子粉（RGLS）

圖2 典型色譜圖（A）；基于分子網(wǎng)絡(luò)的靈芝三萜類成分快速解析圖（B）

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：

1、分別從靈芝孢子粉、破壁靈芝孢子粉和去壁靈芝孢子粉中鑒定出20、96、109種三萜類化合物。說(shuō)明去壁之后三萜類化合物的種類也提高了。

2、以峰面積為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)去壁靈芝孢子粉單個(gè)三萜化合物的含量比破壁靈芝孢子粉提高2倍以上，最高提高超16倍。

這說(shuō)明去壁工藝可以富集靈芝孢子粉的有效成分，顯著提高其含量。

構(gòu)建斑馬魚(yú)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞缺陷模型。

圖3  破壁、去壁靈芝孢子粉對(duì)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞減少癥的藥效作用

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：

1、不同濃度的破壁和去壁靈芝孢子粉作用后，斑馬魚(yú)中性粒細(xì)胞數(shù)量有不同程度的恢復(fù)，其中33 μg/mL的去壁孢子粉可以極顯著促進(jìn)中性粒細(xì)胞的生成數(shù)量，效果也優(yōu)于破壁孢子粉；

2、高濃度的去壁靈芝孢子粉（333、1000 μg/mL）可顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞的形成，并增強(qiáng)其吞噬功能，而破壁孢子粉的作用沒(méi)有顯著性。

這說(shuō)明去壁靈芝孢子粉的作用要優(yōu)于破壁靈芝孢子粉。

圖4 基于偏最小二乘回歸（PLSR）的靈芝孢子粉免疫活性成分分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：

以上結(jié)果提示靈芝孢子粉的免疫調(diào)節(jié)活性與有效成分三萜含量呈正相關(guān)。本研究使用偏最小二乘回歸（PLSR）來(lái)尋找化學(xué)成分（X變量）和活性（Y變量，即中性粒細(xì)胞回收率、巨噬細(xì)胞形成效率、巨噬細(xì)胞吞噬效率）之間的相關(guān)性。如圖4所示，20-hydroxylganoderic acid G、elfvingic acid A、elfvingic C、lucidenic acid I、 ganohainanic acid C等11個(gè)成分得分較高，可能為潛在的免疫活性成分，應(yīng)進(jìn)一步采用體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行活性驗(yàn)證和機(jī)制研究。

本文是以下論文的解析版，如需原文請(qǐng)看：

Zhenhao Li ，Yingqiu Shi ，Xiaohui Zhang ，Jing Xu， Hanbo Wang ， Lu Zhao  and Yi Wang，《Screening Immunoactive Compounds of Ganoderma lucidum Spores by Mass Spectrometry Molecular Networking Combined With in vivo Zebra?sh  Assays》，F(xiàn)rontier in Pharmacology，18 March 2020.